Методы и объем физиологических, биохимических и тезиографических исследований

Изучение изменений функционального состояния различных систем организма и его работоспособности в течение смены позволяет получить представление о реакциях центральной нервной системы, высшей нервной деятельности, системы кровообращения, двигательного и других анализаторов на совокупность физиологических и гигиенических факторов [113]. Подобный методический подход общепризнан в физиологии труда [6, 12, 73, 104, 120, 128].

В числе используемых в физиологии труда методов, исследования функций высшей нервной деятельности, которые были бы адекватны характеру трудовой деятельности, чувствительны и применимы на производстве, используются определение кратковременной памяти и внимания [15, 49, 83, 133].

Функция внимания рассматривается, как избирательная готовность мозга к определенной реакции на строго детерминированные сигналы. Функция исследовалась общепринятым методом нахождения чисел по таблицам Платонова [15]. Учитывались время прямого и обратного поиска, характеризующие концентрацию и объем внимания.

Для определения объема кратковременной памяти использован тест «память на числа» [49, 83, 133]. Испытуемым в течение 30 с. демонстрировали таблицу с произвольно подобранными числами. По окончании экспозиции исследуемому предлагалось за 1 мин письменно воспроизвести запомнившиеся ему числа [62].

Функциональные пробы на задержку дыхания являются показателем предела способности коркового отдела дыхательного центра тормозить активность нижележащих центров, и характеризует чувствительность дыхательного центра к С02. В работе применили пробу на задержку дыхания после глубокого выдоха [62], длительность задержки определяли секундомером три раза и вычисляли среднее арифметическое.

Для оценки подвижности и скорости нервных процессов в динамике смен различной продолжительности использовался ассоциативный эксперимент, учитывали время, потраченное испытуемыми на выполнение теста [62].

По последним данным известно, что прогностическая значимость однократно зарегистрированного артериального давления (АД) довольна низка, а более адекватным показателем могут быть средние величины и суточный характер хронобиологической структуры АД [79, 137, 171, 175]. В связи с этим все большую актуальность приобретают исследования по изучению характера суточного ритма показателей системы кровообращения [35, 47, 59, 74, 82, 85, 94, 130]. В динамике дневных и ночных смен, с интервалом в 4 часа, нами регистрировались такие показатели как, АД и частота сердечных сокращений (ЧСС).

Кожно-кинестетическая чувствительность занимает особое место среди разных видов чувствительности, т. к., является основой движений. Кинестетический анализатор для человека находится на 3-м месте по значимости после визуального и слухового [116]. Измерение разностного порога кинестетической чувствительности рук (связанной с рецепторами, находящимися в мышцах, суставах и сухожилиях) проводилось согласно методике Кекчеева [89].

Для проведения биохимических и тезиграфических методов исследования проводили забор биологического материала (смешанная слюна (ротовая жидкость)). Слюну (2-3 мл) брали в рабочее время, после предварительного ополаскивания полости рта дистиллированной водой. Сбор слюны (в пенициллиновый флакон) проводили в течение 10-15 мин. Пенициллиновый флакон предварительно промывался в мыльном растворе, затем в дистиллированной воде, сушился в сушильном шкафу. В случаях резко выраженной гипо - или гиперсаливации пробу для анализа не использовали.

Отобранные пробы немедленно помещались в холодильник (t +5 - +7 °С). В случае отсутствия холодильника, транспортировка проб в течение не более 2 часов. Охлажденную слюну центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин. Для биохимических исследований биологический материал замораживали (t — 18 °С), размораживание происходило при t +4 °С непосредственно перед исследованием.

Биохимические исследования проводились с учетом научно - методических рекомендаций заведующего кафедрой биохимии ГОУ ВПО КемГМА Росздрава проф. A. C. Разумова [96].

В экспериментальных и клинических работах доказана роль изучения активности ферментов АОЗ и концентрации продуктов ПОЛ для оценки состояния окислительного стресса [2, 117, 123]. При изучении состояния перекисного окисления липидов, чаще оценивают активность таких энзимов, как, супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы [45, 69, 146, 176].

Активность СОД (672 анализа) определяли хемшноминесцентным методом, по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) в присутствии НАДН и феназинметасульфата (ФМС) [119]..

Принцип определения активности каталазы основан на том, что катал аза взаимодействует с перекисью водорода. Интенсивность окраски образовавшихся перекисных соединений оценивали на анализаторе СФ с последующим расчетом активности каталазы в условных единицах [118]. Выполнено 672 анализа.

В настоящее время наиболее чувствительным и адекватным методом мониторинга процессов ПОЛ является тест на определение в биологических жидкостях ТБК-рп (продукты липопероксидации, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой) [34, 158,166].

Для определения ТБК-рп (640 определений) применили флюорометрический метод. Метод основан на том, что конечные продукты переокисления липидов (ТБК-рп) образует с тиобарбитуровой кислотой окрашенный триметиновый комплекс, интенсивность света которого прямо пропорциональна их концентрации [17].

С позиций ритмологии любые отклонения от физиологической нормы (состояние стресса, перенапряжение) повлекут за собой нарушения ритма разных уровней. По мнению ряда авторов такого рода нарушения мы можем наблюдать при самоорганизации биологических жидкостей [53, 122, 124]. Кристаллообразование биожидкостей - простой и доступный метод ранней диагностики патологических изменений в организме человека [3, 125].

Тезиграфический метод исследования был использован с целью оценки изменений ритма биологических жидкостей организма в динамике дневных и ночных смен различной продолжительности. В качестве самой доступной биожидкости в производственных условиях была выбрана слюна.

Для кристаллографии слюны был использован метод «тест-капли» [102]. Кристаллография выполнена 4-х кратно у работающих 12-часовые смены (68 человек), 3-х кратно у работающих по 8-часовому графику (44 человека). Всего проанализировано 404 мазка.

Для приготовления «тест-капли» на предметное стекло к 50 мкл слюны добавлялось 50 мкл 0,9% физиологического раствора (ЫаС1). Кристаллообразование осуществлялось в термостате при температуре +37°С в течение 4 часов.

Микроскопическая оценка кристаллограмм проводилась согласно методическим рекомендациям [57, 64, 106], с увеличением под микроскопом в 8 и 56 раз.

Биохимические и тезиграфические исследования слюны выполнены лично автором.